Sūkurys nenuskirs jūsų RNR, kad ji taptų netinkama, jei atliekate atsitiktinį pradinį RT – tik jei norite klonuoti ilgą mRNR. „Invitrogen“techninė pagalba taip pat yra teisinga. Chloroformas yra sunkesnis už Trizol ir nugrims į vamzdelio dugną.
Ar saugu sukti RNR?
Nemaišykite Trizol lizatų arba RNR mėginių, kad išvengtumėte kirpimo. Po ekstrahavimo RNR mėginius visą laiką laikykite ant ledo. Šis protokolas skirtas mėginiams, lizuojamiems 1 ml Trizol 1,5 arba 2 ml mėgintuvėlyje.
Ar galite pašildyti RNR?
Todėl venkite aukštos temperatūros ( virš +65°C), nes tai turi įtakos RNR vientisumui. Norėdami išlydyti antrines struktūras, kaitinkite RNR iki +65°C 15 minučių, esant denatūruojantiems buferiams.
Kaip resuspenduoti RNR granules?
pakartotinai suspenduokite granules šiltame vandenyje (40–50 laipsnių Celsijaus). inkubuoti 10 min 45 laipsnių temperatūroje. įdėkite juos į +4 4–6 valandoms.
Kaip nusodinate RNR?
A.
Pareguliavus druskos koncentraciją, RNR gali būti nusodinama pridedant 2,5 tūrio etanolio arba 1 tūrio izopropanolio ir gerai išmaišius, po to atšaldomas bent 15 minučių -20°C temperatūroje.
