Koks geriausias būdas atskirti chloroplastus nuo buferio?

2024 Autorius: Fiona Howard | [email protected]. Paskutinį kartą keistas: 2024-01-10 06:40

Kad būtų galima išgauti pigmentus, chloroplastai suspenduojami izoliaciniame buferyje. Kad galėtume išskirti pigmentus iš chloroplastų, pirmiausia turime atsikratyti buferio. Koks yra geriausias būdas atskirti chloroplastus nuo buferio? naudokite centrifugą, kad atskirtumėte

Kaip išskirti chloroplastą?

Taikant chloroplasto išskyrimo metodą, ląstelės sienelė sulaužoma mechaniškai, naudojant maišytuvą arba homogenizatorių. Tada nesulaužytas lapų audinys ir ląstelių liekanos pašalinamos filtruojant. Chloroplastai surenkami centrifuguojant, naudojant perkolio gradientą.

Kaip pasigaminti chloroplasto izoliavimo buferį?

Paruoškite reikiamą 1X chloroplasto išskyrimo buferio kiekį 2X buferinį tirpalą praskiesdami 1:1 dH2O vandeniu Įpilkite 10 µL 10 % BSA tirpalo vienam ml 1X chloroplasto Izoliacijos buferis. Prieš pat naudojimą įpilkite 1 µL DTT į 1 ml chloroplasto izoliavimo buferio. Pažymėkite šį buferį kaip „Visas buferis“.

Kas yra chloroplasto išskyrimo buferyje?

DNR išskyrimo buferį sudarė 100 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl (pH 8,0), 50 mM EDTA ir 1 mM DTT Chloroplasto lizė buvo gauta inkubuojant chloroplasto nuosėdas su 8 ml DNR išskyrimo buferio, 1,5 ml 20 % SDS, 20 µl 2-merkaptoetanolio ir 30 µl proteinazės K (10 mg/ml) į centrifugavimo mėgintuvėlį 55 °C temperatūroje 4 val.

Koks yra buferio, naudojamo špinatų lapams homogenizuoti pagal chloroplasto išskyrimo protokolą, pH?

Špinatuose yra gerų chloroplastų ir jie lengvai išsiskiria. Turėsite įdėti lapus į š altą maišytuvą su 0,1 M fosfato buferiu, pH 7,5 ir 0,5 M sacharoze, kad jie nesutrūktų.