Logo lt.boatexistence.com

Kodėl kompetentingos ląstelės turi būti laikomos ant ledo?

Turinys:

Kodėl kompetentingos ląstelės turi būti laikomos ant ledo?
Kodėl kompetentingos ląstelės turi būti laikomos ant ledo?

Video: Kodėl kompetentingos ląstelės turi būti laikomos ant ledo?

Video: Kodėl kompetentingos ląstelės turi būti laikomos ant ledo?
Video: Competent Cell Transformation 2024, Gegužė
Anonim

Laikykite juos ŠALTA! Kompetentingų ląstelių gamybos procesas yra sudėtingas, nes ląstelės turi likti š altos. Tai labai svarbu, nes ląstelės yra labai jautrios ir trapios, kol jos tampa kompetentingos Žemos temperatūros palaikymas padeda išvengti ląstelių žūties apdorojimo metu.

Kodėl transformacijos eksperimento metu reakcijos laikomos ant ledo?

Plazmidžių ir ląstelių mišinys trumpam kaitinamas iki 45–50 °C, kad DNR galėtų patekti į ląstelę per pažeistą membraną. Tada pašildytas mišinys dedamas atgal ant ledo , kad plazmidės liktų bakterijų viduje … Jei plazmidės DNR tirpale yra per daug druskos, gali susidaryti lankas, pakenkdamas transformacijai.

Kodėl dedate vamzdelius ant ledo?

Kodėl, jūsų manymu, mes uždėjome vamzdelius ant ledo? Kad DNR patektų į bakterijas, turime į jas išdurti skylutes cheminiu kalcio chloridu (CaCl2). … Iškištos skylės, kad DNR patektų, bakterijos nutekėtų. Jei nelaikysime jų ant ledo, jie mirtinai „nukraujuos“.

Koks ledo š alto kalcio chlorido vaidmuo ruošiant kompetentingas ląsteles?

Kalcio chlorido šilumos šoko transformacijos procesas skatina bakterijų ląsteles paimti DNR iš supančios aplinkos. … Ledo š altas CaCl2 tirpalas palengvina DNR prisijungimą prie ląstelės paviršiaus, kuri po trumpo karščio šoko patenka į ląstelę (3).

Kaip saugote kompetentingas ląsteles?

Kompetentingos ląstelės turi būti laikomos - 80 °C temperatūroje. Laikant -20 °C temperatūroje labai sumažės transformacijos efektyvumas (TE). Išbandžius NEB 5-alfa kompetentingą E. coli (NEB C2987H), ląstelės prarado 94,5 % TE tik po 24 valandų laikymo -20 °C temperatūroje.

Rekomenduojamas: