Jei jūsų b altymas nėra tokio pat dydžio kaip jūsų antikūnas, galite eliuuoti 0,1M glicinu, pH 2–3 ir tada atskirti dominantį b altymą nuo antikūno naudodami SEC. (kaip superdex 200).
Kas išplauna b altymą?
B altymai eliuuojami augančio organinio tirpiklio, pvz., acetonitrilo, kiekių gradientu. B altymai eliuuoja pagal savo hidrofobiškumą. Išvalius HPLC, b altymas yra tirpale, kuriame yra tik lakiųjų junginių, ir jį galima lengvai liofilizuoti.
Kodėl b altymų pH yra žemas?
Žinoma, kad žemo pH buferio naudojimas eliuuojant iš b altymo A prisideda prie produkto agregacijos Tačiau ribotas įrodymų rinkinys rodo, kad žemas pH gali būti ne vienintelis Agregacijos priežastis b altymo A chromatografijoje, o kiti proceso aspektai gali reikšmingai prisidėti.
Kaip atliekamas eliuavimas?
Analitinėje ir organinėje chemijoje eliuavimas yra vienos medžiagos ištraukimas iš kitos plaunant tirpikliu; kaip ir plaunant įkrautas jonų mainų dervas, kad būtų pašalinti užfiksuoti jonai. … Kai tirpiklio molekulės išstumia analitę, analitę galima išnešti iš kolonėlės analizei.
Kiek antikūnų jums reikia Coip?
Įprastiems Co-IP eksperimentams mano naudojamas antikūnas yra ne daugiau kaip 2 ug (mano rinkinyje 1,4–2,0 g antikūnų pakanka, kad būtų užfiksuota 2500–5000 ug b altymų lizatas.) Tačiau tai vis tiek priklauso nuo tikslinių b altymų ekspresijos lygių jūsų mėginiuose, todėl tikriausiai turėsite atlikti kai kuriuos pakeitimus.
