Siekiant sumažinti nespecifinį antikūnų prisijungimą ir dėl to foninį signalą, rekomenduojama naudoti blokuojantį tirpalą prieš inkubuojant su antikūnais Veiksmingiausias blokavimo sprendimas bus turi būti serumo iš tos pačios rūšies, kurioje susidarė antrinis antikūnas.
Kaip išvengti fono dėmių?
Audinių dalių storio mažinimas gali padėti sumažinti fono dėmę. Pabandykite nupjauti plonesnes dalis, kad IHC būtų švaresnis. Taip pat svarbu pasirūpinti, kad sekcijos neišdžiūtų, nes džiovinimas gali sukelti daug nespecifinių dėmių.
Kaip optimizuoti imunofluorescenciją?
Imunofluorescencinė mikroskopija: 10 techninių patarimų, kaip pasisekti
- Ląstelių fiksacija ir pralaidumas. …
- Antikūnų specifiškumas. …
- Naudojant atitinkamą antikūnų skiedimą. …
- Buferių ir blokavimo priemonių optimizavimas. …
- Naudokite tinkamą ląstelių tankį. …
- Daugybinis dažymas. …
- Antriniai antikūnai. …
- Fono mažinimas.
Kas sukelia fono dažymą?
Fono dažymas gali atsirasti dėl netinkamo antikūnų surišimo arba klaidų ruošiant audinio stiklelį.
Ar antriniai antikūnai sumažina foninius signalus?
F(ab) specifiniai antriniai antikūnai gali padėti sumažinti foninį signalą pašalindami nespecifinįIgG b altymų, kuriuos audiniuose randa antrinis antikūnas, surišimą.
